文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 菌种

    1.1.2 药物与试剂

1.2 方法

    1.2.1 C. albicans菌悬液的制备

    1.2.2 药物的配制

    1.2.3 芽管形成试验

    1.2.4 厚朴煎剂对白色念珠菌早期黏附基因1(agglutinin-like sequencefamily,ALS1)、ALS2、ALS3的影响

        1.2.4.1 样品的制备

        1.2.4.2 提取RNA

        1.2.4.3 引物及其合成

        1.2.4.4 qRT-PCR定量分析

    1.2.5 荧光显微镜观察厚朴煎剂对白色念珠菌成熟期生物膜的影响

    1.2.6 扫描电镜(scanning electron microscope,SEM)观察厚朴煎剂对白色念珠菌成熟期生物膜的影响

    1.2.7 激光共聚焦显微镜观察厚朴煎剂对白色念珠菌成熟期生物膜内菌活力的影响

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 不同浓度厚朴煎剂对白色念珠菌芽管形成的影响

2.2 厚朴煎剂对白色念珠菌早期黏附基因相对表达量的影响

2.3 不同浓度厚朴煎剂对白色念珠菌成熟生物膜的影响

2.4 厚朴煎剂对白色念珠菌成熟期生物膜内菌活力的影响

3 讨论

文章摘要:目的 观察厚朴煎剂对白色念珠菌（Candida albicans）芽管形成、早期黏附基因及成熟期生物膜的影响。方法 采用芽管形成试验检测厚朴煎剂对白色念珠菌芽管形成的影响;实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测厚朴煎剂作用后,凝集素样序列1（agglutinin-like sequencefamily1,ALS1）、ALS2、ALS3基因的表达情况;荧光显微镜及扫描电镜观察厚朴煎剂对白色念珠菌成熟期生物膜的影响;共聚焦显微镜观察厚朴煎剂对生物膜中菌活性的影响。结果 芽管形成试验结果显示,厚朴煎剂可抑制白色念珠菌的芽管形成且抑制作用具有浓度依赖性（P<0.05）。厚朴煎剂能使ALS1、ALS2、ALS3基因表达下调且具有浓度依赖性（P<0.05）。荧光显微镜下空白对照组生物膜以菌丝为主,厚朴煎剂作用24、48及72 h后生物膜结构被破坏。扫描电镜结果也提示厚朴煎剂可以破坏生物膜的结构。共聚焦显微镜下空白对照组白色念珠菌以活菌为主,15.625 mg/L厚朴煎剂作用48 h后死菌数量明显增加。结论 厚朴煎剂可通过下调ALS1、ALS2、ALS3基因抑制白色念珠菌早期黏附,同时可通过破坏成熟期生物膜的结构促进药物进入生物膜内抑制芽管形成和发挥杀菌作用。

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